Évaluation de la restauration fonctionnelle p.Phe508del-CFTR dans les cellules épithéliales des voies respiratoires de la mucoviscidose primaire pédiatrique.

Les mutations du gène du régulateur transmembranaire de la mucoviscidose (CFTR) peuvent réduire la fonction de l'activité des canaux ioniques CFTR et altérer la sécrétion cellulaire de chlorure. La méthode de référence pour évaluer la fonction CFTR du transport d'ions à l'aide de la chambre d'Ussing nécessite un nombre élevé de cellules épithéliales des voies respiratoires cultivées à l'interface air-liquide, limitant l'application de cette méthode pour le criblage à haut débit de composés thérapeutiques potentiels dans les cellules épithéliales primaires des voies respiratoires (pAEC) présentant des mutations CFTR moins courantes. Cette étude a évalué une approche alternative, utilisant un test aux halogénures à petite échelle qui peut être adapté pour un paramètre personnalisé à haut débit pour analyser la fonction CFTR de pAEC. Les pAEC pédiatriques dérivées d'enfants atteints de mucoviscidose (pAECCF) ont été établies et développées sous forme de cultures monocouches, avant d'être ensemencées dans des plaques à 96 puits pour le test aux halogénures. Les cellules ont ensuite été transduites avec une construction adénovirale contenant le gène rapporteur de la protéine fluorescente jaune (eYFP), seul ou en combinaison avec du CFTR de type sauvage (WT-CFTR) ou du p.Phe508del CFTR. Quatre jours après la transduction, les cellules ont été stimulées avec de la forskoline et de la génistéine et évaluées pour l'extinction du signal eYFP après l'injection d'une solution d'iodure dans le milieu de test. Les données ont montré que pAECCF peut exprimer eYFP avec une efficacité élevée après transduction avec la construction eYFP. Le test aux halogénures a permis de distinguer la restauration fonctionnelle du CFTR dans le pAECCF traité avec la construction WT-CFTR ou les contrôles positifs syntaxine 8 et la protéine 31 shARN associée au récepteur des cellules B. La présente étude démontre que le test aux halogénures peut être adapté au pAECCF pédiatrique pour évaluer la restauration de la fonction CFTR. Avec le développement continu de petites molécules pour moduler le repliement et/ou l’activité de diverses protéines CFTR mutées, ce test aux halogénures présente une plateforme de criblage personnalisée à petite échelle qui pourrait évaluer le potentiel thérapeutique des molécules dans un large éventail de mutations CFTR.